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Détection moléculaire de l’ADN de Bartonella henselae dans la pulpe dentaire des chats français -Anciens-Vieux

Les espèces de Bartonella sont responsables de bactériémies chroniques chez les chats domestiques, ce qui soulève une question sur l’ancienneté de la relation entre les Bartonella et les chats qui agissent comme réservoirs pour l’organisme. Le séquençage des gènes Bartonella pap et groEL de la pulpe dentaire des chats. aux siècles suivants, la présence du génotype B henselae Houston a été identifiée; l’observation d’une mutation unique dans les résultats des tests de PCR pour les espèces de Bartonella exclu la contamination moderne de l’ADN des échantillons de pulpe dentaire Nous concluons que les chats ont eu une bactériémie due à B henselae il y a des années

Le genre Bartonella comprend des bacilles facultatifs, intracellulaires et fastidieux de la sous-classe α des protéobactéries. Les caractéristiques communes de Bartonella comprennent la transmission par un vecteur arthropode et la survie chez des mammifères hôtes qui agissent comme réservoirs Quatre espèces de Bartonella ont été isolées chez des chats domestiques catus, en particulier: Bartonella henselae , Bartonella clarridgeiae , Bartonella koehlerae , et, à une occasion, Bartonella bovis anciennement Bartonella weissii B henselae est transmise à l’homme par des égratignures ou des morsures de chats ou la puce du chat Ctenocephalides felis , et l’organisme peut provoquer une maladie des griffes CDD, angiomatose bacillaire, péliose hépatique et endocardite D’autres félins, comme les lions de montagne Felis concolor, les lynx roux Felis rufus et les panthères de Floride, peuvent aussi être infectés par B henselae Les espèces de Bartonella sont responsables de bactériémies chroniques et asymptomatiques chez les chatons et les chats adultes, avec une prévalence élevée. e de cas – allant de% à% – chez des chats apparemment sains [,,] B henselae, qui comprend des sous-espèces ou des génotypes – les génotypes Houston , Marseille et Berlin – identifiés à l’aide d’une séquence multilocus typing , est distribué chez les chats et les humains dans le monde Bien que les génotypes de Marseille et de Houston aient été retrouvés chez l’homme, le génotype Berlin n’a été identifié qu’en Allemagne Chronique, la bactériémie asymptomatique est une maladie exceptionnelle chez les mammifères et Bartonella chez les chats est un modèle unique pour l’étude de l’ancienneté de la relation entre les chats et les espèces de Bartonella et leur coévolution La détection et l’analyse des séquences d’ADN de Bartonella récupérées sur des spécimens de chat prémodernes peuvent aider à répondre à ces questions epilepsie. Cette étude visait à étudier la présence de l’ADN des espèces de Bartonella dans la pulpe dentaire des chats français datée du ier au Les restes pulvérulents de pulpe dentaire ont été raclés sur les dents, et l’ADN total a ensuite été extrait de la pulpe dentaire, comme indiqué ailleurs Toutes les manipulations ont été effectuées séparément dans différents laboratoires dans lesquels seulement Les espèces non-Bartonella ont été manipulées auparavant, pour éviter toute possibilité de contamination moléculaire moderne des échantillons d’ADN prémodernes. Chaque étape de l’expérience a été réalisée dans une pièce séparée, avec un équipement jetable et des réactifs nouvellement préparés. Espèces de Bartonella, les échantillons de contrôle PCR positifs n’ont jamais été utilisés , et les dents témoins ont été extraites de chats contemporains après vérification de l’absence de l’ADN de Bartonella par PCR En outre, des tests de contrôle pour la contamination ont été remplacés par de l’eau stérile , ont été inclus pour chaque dosage PCR Les amplifications ont été réalisées dans un mélange -μL préparé comme décrit ci-dessus où Les séquences des amorces ciblant le gène groEL ont été précédemment rapportées ailleurs Les séquences des amorces ciblant le gène Pap étaient PAPFEXT: positions «-GATTCTAGGAGTTGAAACCGA-»; Bartonella henselae [numéro d’accession GenBank AF], PAPREXT: positions «-ACGCGAGTAGCACCAGACCA-», PAPFINT: «-TGACAGAGAAGACGCAAAAA-» positions, et PAPRINT: «-CCTTTAAAGCTAAACTATCTG-» positions – PCR inclus dénaturation à ° C pendant min, suivi de cycles de la séquence suivante: dénaturation à ° C pendant s, hybridation des amorces à ° C ou à ° C pour les amorces HSPps pour s, et allongement à ° C pour s La PCR Nested a été réalisée directement dans un volume final de μL dans les mêmes conditions L’amplification a été complétée en maintenant le mélange réactionnel à ° C pendant min pour permettre une extension complète des produits de PCR Après purification du kit Milipore Multiscreen; Milipore SAS et kit de clonage pGEM-T Easy Vector System II; Promega, les réactions de séquençage ont été réalisées en utilisant le kit de séquençage V Big Termes Terminator Cycle Perkin-Elmer Biosystem et les séquences Biosystem Applied Biosystem Applied ont été alignés en utilisant l’alignement multisequence Clustal W, version, et ont été comparés avec des séquences qui étaient disponibles dans GenBank

Figure Vue largeTélécharger la distribution géographique des chats français prémodernes utilisés dans une étude de l’ancienneté de Bartonella henselae infection chez les chats domestiques -, négatif; , positiveFigure View largeTélécharger slideRépartition géographique des chats français prémodernes utilisés dans une étude de l’ancienneté de l’infection à Bartonella henselae chez les chats domestiques -, négatif; , positivesResults Aucune amplification n’a été obtenue pour les dents témoins PCR-négatives ou pour les contrôles de contamination en utilisant les tests PCR pour les gènes pap et groEL. Pour les amorces ciblant le gène groEL, un amplicon de la taille -bp attendue a été obtenu à partir de l’ADN Les séquences dérivées des clones de chat et de chat étaient identiques à la séquence du génotype moderne de B henselae, le gène groEL Houston GenBank numéro d’accès AF, alors que les séquences obtenues à partir de clones de Les gènes étaient identiques chez le chat et présentaient une mutation par rapport au génotype B henselae de la séquence du gène groEL de Houston A → G dans le codon, traduisant la traduction d’une lysine en acide glutamique. Numéro d’accession GenBank AY figure Pour les amorces ciblant le gène Pap, un amplicon de la taille -bp attendue a été obtenue à partir d’extraits d’ADN dérivés des mêmes chats. La séquence de ces amplicons clonés dentique à celle de la souche de B henselae phage SA-pap gène Numéro d’accession GenBank AF

, montrant une mutation A → G, qui a été déterminée chez le chat Figure View largeTélécharger la séquencePartial du gène Bartonella henselae groEL, montrant une mutation A → G, qui a été déterminée chez le chat Discussion Nous avons détecté B Henselae groEL et fragments de gène pap dans le dentaire pulpe de chats datant des th e, th et th siècles Nous pensons que la découverte de séquences identiques ne résulte pas de la contamination moderne des spécimens, en raison des précautions importantes que nous avons prises. Les spécimens ont été manipulés dans des laboratoires dans lesquels les espèces de Bartonella n’ont jamais été manipulé précédemment, comme recommandé récemment , et aucune amplification n’a été obtenue pour les dents témoins PCR-négatives ou pour les contrôles de contamination. Les dents PCR-positives ont été testées en utilisant différents ensembles d’amorces ciblant différentes régions, et la détection d’une Une mutation dans la séquence groEL étudiée dans les spécimens a définitivement exclu la contamination par l’ADN moderne de Bartonella. La présente étude fournit des preuves supplémentaires de l’utilité de la pulpe dentaire pour la détection des microorganismes à diffusion hématogène Coxiella burnetii L’ADN et le burnetii viable ont été récupérés à partir de pulpes dentaires de cobayes bactériémiques infectés expérimentalement par C. burnetii Chez l’homme, le génome du VIH a été détecté dans la pulpe dentaire de patients atteints de SIDA ADN pestis dans la pulpe dentaire de restes humains datant de pandémies historiques de peste L’exploitation de pulpe dentaire est un outil pratique dans l’étude des maladies bactériémiques, car elle permet la récupération de l’ADN d’une cavité naturellement fermée sans la nécessité de décalcification Il convient de préciser que la dentine n’est pas comparable à la pulpe dentaire, en raison de l’absence de système de vascularisation entine; ceci explique pourquoi la dentine n’offre aucun avantage sur la pulpe dentaire. Nous étendons maintenant l’utilisation de la pulpe dentaire à la détection des espèces pathogènes de Bartonella prémodernes dans leur réservoir. La détection des pathogènes prémodernes dans leur réservoir et leur vecteur a rarement été utilisée. Spirochète de la maladie de Lyme Borrelia burgdorferi dans les tiques européennes archivées qui avaient été conservées dans l’éthanol et dans les rongeurs archivés B henselae génotype Houston a été trouvé chez les chats PCR-positifs, ce qui suggère la persistance continue de ce pathogène chez les chats français Les données archéologiques et historiques indiquent que les chats que nous avons trouvés positifs à la PCR ont vécu en contact étroit avec des personnes largement rapporté comme scrofule dans la littérature médiévale et les sources historiques Les rois français et anglais avaient le pouvoir divin de guérir la scrofule en touchant des personnes qui semblaient avoir la maladie que Scrofula a été attribuée à la tuberculose, mais certains cas peuvent, en fait, être autolimitatifs. cure « réalisée par le traitement royal Il est intéressant que la pratique formelle du rite cérémoniel remonte au siècle en France Des analyses moléculaires ont suggéré que les espèces de Bartonella associées aux rongeurs indigènes du Nouveau Monde étaient phylogénétiquement distinctes de Les espèces de Bartonella qui ont été récupérées chez les rongeurs de l’Ancien Monde, ce qui suggère que les espèces séparées par la dérive des continents ont évolué indépendamment les unes des autres Comme pour B henselae, des génotypes ont été signalés en Europe; Dans le Nouveau Monde, des preuves sérologiques indiquent que les félins continentaux, y compris le félin F rufus et le lion de montagne F concolor, ont été infectés par un organisme ressemblant à B henselae. De grandes séries d’infections à B henselae chez l’homme ont rarement été rapportées dans le monde Les données montrent qu’une majorité des infections à B henselae en Australie sont dues au génotype de Houston , alors qu’en Europe, les génotypes de Houston et de Marseille ont été identifiés. Des taux comparables chez les patients infectés par B henselae La distribution actuelle des génotypes B henselae peut résulter de l’évolution divergente des souches de B henselae associées aux félins après la dérive des continents. Des échanges transcontinentaux supplémentaires de génotypes peuvent avoir eu lieu après Columbus Here, nous fournissons des preuves que B henselae génotype Houston était présent en France avant l’époque de Columbus Cette hypo Cette thèse justifie d’autres études, y compris des études sur des spécimens de chats prémodernes provenant du Nouveau Monde, ainsi que d’Égypte, où le chat est supposé avoir été domestiqué en premier