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La charge virale dans le sang est corrélée à la gravité de l’infection néonatale à Coxsackievirus B: le diagnostic précoce et la prédiction de la gravité de la maladie sont possibles dans les infections sévères à entérovirus néonatal

Nous avons mené une étude au cours d’une épidémie d’infection à Cxsackievirus B et constaté que l’ARN viral pouvait être détecté dans les prélèvements sanguins des patients peu après le début de la fièvre et que le taux d’ARN viral était positivement corrélé avec la gravité de la maladie. infection à entérovirus néonatal

L’étude du rôle de la virémie dans les manifestations cliniques de l’infection à entérovirus n’est pas facile à réaliser en utilisant la méthode traditionnelle d’isolement du virus. En raison du caractère transitoire de la virémie et de la grande quantité de sang nécessaire à l’isolement du virus, L’utilisation de la RT-PCR pendant les premiers jours de la maladie offre des avantages potentiels pour le diagnostic précoce, le traitement en temps opportun et les économies de coûts pour les nourrissons avec un diagnostic précoce de l’infection par entérovirus. Néanmoins, la corrélation entre la sévérité de la maladie et la charge virale sanguine par RT-PCR en temps réel n’a pas été évaluée chez les nouveau-nés avec infection entérovirale. En mai-août, une épidémie de coxsackie B s’est produite à Taiwan. une occasion de mener cette étude pour évaluer la corrélation entre la sévérité de la maladie et la charge virale avec Patients et méthodesUn total de nourrissons et d’enfants ayant une infection à CVB prouvée par culture ont été traités à l’hôpital pour enfants de Chang Gung Taiwan en mai-août. Un total de patients néonatals a été noté, et parmi eux, étaient & lt; jours d’âge Parmi tous les patients néonatals, dont étaient âgés & lt; jours ont été classés comme ayant une infection sévère infection sévère a été définie comme la présence de l’hépatite sérique aspartate aminotransférase et les niveaux d’alanine aminotransférase de & gt; fois les limites supérieures de la normale pour l’âge et la coagulopathie numération plaquettaire, & lt ;, plaquettes / μL, plus un profil de coagulation anormal D’autre part, les autres nouveau-nés dont était âgé & lt; jours ont été classés comme ayant une infection bénigne, qui comprenait une maladie fébrile non spécifique ou méningite viraleDurant la période d’étude, tous les parents des patients admis au centre de soins néonatals où les nourrissons âgés de & lt; mois sont traités ont été contactés si l’infection entérovirus a été confirmée par culture ou était hautement suspectée, par exemple, s’il y avait des antécédents familiaux d’infection à entérovirus ou si la maladie maternelle au moment de l’accouchement a été notée tous les patients, y compris les nouveau-nés et les nourrissons ont été inclus dans cette étude, parce que le consentement écrit était disponible Des échantillons de sang mL dans un tube EDTA obtenus pour la mesure d’autres paramètres pendant l’hospitalisation et le suivi ambulatoire ont également été utilisés pour la mesure de la charge virale. L’isolement de l’entérovirus et l’identification du CVB ont été effectués en utilisant des procédures standard pour les pathogènes respiratoires et entériques. Le protocole pour la RT-PCR en temps réel a été réalisé lors de chaque visite à la clinique ambulatoire jusqu’à disparition de l’entérovirus. modifié de celui utilisé par Watkins-Riedel et al Brièvement, l’ARN viral a été extrait à partir d’échantillons de sang total en utilisant le kit Qiagen viral RNA Qiagen Qiagen Un kit Qiagen a été utilisé, et la position de l’amorce était la région conservée de la région non codante de l’entérovirus. l’amorce et les séquences de sondes fluorescentes étaient une amorce directe, ‘-CCCCTGAATGCGGCTAATCC-‘; primaire inverse, ‘- CAATTGTCAGGATAAGCAGCC-‘; et séquence de sonde, ‘-FAM-CACGGACACCCAAAGTAGTCGGTTCC-TAMRA RT-PCR en temps réel a été réalisée en utilisant le Bio-Rad iCycler Bio-Rad Les conditions cycliques thermiques comprenaient min à ° C pour la transcription inverse et min à ° C pour l’activation de Taq polymérase La taille du produit de PCR amplifié était bp Pour la détermination quantitative de l’ARN entéroviral, l’ADNc d’un étalon de CVB a été cloné par le système Escherichia coli et a été réalisé en parallèle avec des échantillons en temps réel. RT-PCR La limite de détection de CVB était de copies / μL par des tests RT-PCRMann-Whitney en temps réel Des tests de Wilcoxon rank sum ont été utilisés pour tester la différence de charge virale entre infections sévères et légères entérovirus Kaplan-Meier pour tester la différence de persistance de la virémie entre les infections graves et légèresRésultatsDonnées démographiques, les données de laboratoire, le niveau d’ARN viral sanguin et les méthodes utilisées pour le traitement des patients sont présentés dans le tableau Parmi les Les patients inclus dans cette étude, avaient des patients atteints de maladies graves, et avaient une maladie bénigne. Les autres nourrissons avaient des mois. Tous avaient une maladie bénigne fréquence. Une fièvre a été notée chez tous les patients et une antibiothérapie empirique a été administrée à tous les patients. patients à l’admission Tous les patients atteints de maladies graves – transfusions de composants sanguins, y compris plaquettes, globules rouges emballés, plasma frais congelé et perfusions IgG IV Les patients atteints de maladies bénignes – ont reçu des soins de soutien seulement Tous les patients ont été libérés dans un état stable et aucune complication n’a été notée lors de leurs visites de suivi

Données de données démographiques, manifestations cliniques et utilisation d’IgG IV par voie intraveineuse chez les patients de l’étudeTable View largeTélécharger Données démographiques, manifestations cliniques et utilisation d’IgG intraveineuses IV chez les patients de l’étudeComme la durée de la période entre l’apparition de la maladie et l’hospitalisation variait, Cependant, nous avons noté que la virémie a été détectée peu après l’apparition de la maladie. Chez tous les patients, la plus forte charge d’ARN viral a été détectée dans le premier échantillon de sang, puis la charge virale en ARN a diminué progressivement. patients âgés de & lt; jours patients -, tous avec une maladie grave, la plus forte charge virale ARN détectée était & gt ;, copies / μL Pour les patients âgés de – mois patients -, tous avec une maladie bénigne, la charge virale la plus élevée détectée était & lt; copies / μL La charge virale ARN la plus élevée chez les patients atteints de maladies graves – significativement plus élevée que chez les patients atteints de maladies bénignes – P =, par le test de Mann-Whitney Deux patients patients et des échantillons de sang disponibles pour la détermination de la charge virale Nous avons également noté qu’une charge d’ARN viral plus élevée correspondait à un pic plus élevé de taux d’aspartate aminotransférase dans le sérum chez ces nourrissons. La durée de l’ARN viral détectable dans les prélèvements sanguins était significativement plus longue chez les patients avec une maladie sévère P =, par test de log-rank, analyse de Kaplan-Meier Chez les patients et, l’ARN viral restait détectable dans le sang mois après l’apparition de la maladie. ; semaines à des patients qui ont reçu des visites de suivi régulières à la clinique externe, et aucune différence significative n’a été notée entre les patients atteints de maladie sévère et légère.Discussion À notre connaissance, il s’agit de la première étude à étudier la corrélation entre la charge virale et la sévérité de la maladie. infection à entérovirus Une forte association a été notée entre une charge virale plus élevée, un âge plus jeune et une plus grande sévérité de la maladie; cette constatation est compatible avec celle proposée par Dagan et coll. L’association de charge virale plus élevée et de plus jeune âge peut être le résultat d’un mode de transmission périnatale ou de l’immaturité du système immunitaire néonatal, et il est possible que La charge est responsable d’une plus grande sévérité de la maladie chez ces patients. Néanmoins, cette hypothèse doit être clarifiée davantage en raison du manque de sujets témoins. jours avec une maladie bénigne Sur la base des données de l’étude, une charge virale plus élevée, un âge plus jeune et une plus grande sévérité de la maladie ne peuvent être séparés Nous pensons que les données montrent que la charge d’ARN viral sanguin peut être utilisée pour diagnostiquer et prédire En outre, la durée de l’ARN viral détectable dans le sang était plus élevée, en plus de l’âge d’apparition, du sérotype viral et du mode de transmission, que la transmission verticale ait eu lieu. Étant donné que ces patients étaient cliniquement sains, la persistance de l’ARN viral mois après l’apparition de la maladie peut indiquer un acide nucléique libre, au lieu de particules infectieuses, dans le sang La différence de persistance de la charge virale entre les patients sévèrement et légèrement infectés doit être clarifiée L’IgG contient différents niveaux d’anticorps dirigés contre plusieurs types d’entérovirus, et on observe une cessation plus rapide de la virémie et de la viurie chez les patients recevant une IgG IV contenant un titre élevé pour leurs propres isolats viraux ont constaté une diminution rapide de la charge virale en ARN viral après l’administration d’IgG IV chez les nouveau-nés qui l’ont reçu. Il est possible que l’administration d’IgG IV soit bénéfique pour réduire la charge virale sanguine, mais des études supplémentaires sont nécessaires. Notre étude a révélé la possibilité d’utiliser la charge virale sanguine telle que déterminée par RT-PCR en temps réel pour un diagnostic précoce et pour prédire la gravité de la maladie dans l’infection à entérovirus néonatal – beaucoup plus tôt qu’à partir des résultats de l’isolement du virus Un diagnostic précoce conduit à un traitement plus rapide et plus définitif des nouveau-nés avec une infection sévère à entérovirus, en particulier lors d’une épidémie d’entérovirus

Remerciements

Soutien financierChang Gung Memorial Hospital CMRPG Conflits d’intérêts potentielsTous les auteurs: pas de conflits